人脐带间充质干细胞连续传代实验

◆连续传代培养实验

1. 材料及方法：采集足月顺产或剖宫产健康胎儿脐带，经双抗处理后分离Wharton胶，Wharton胶用0.1%Ⅳ型胶原酶振荡消化4h，再加入Hanks液离心（2000rpm，10min），重悬后接种，细胞1:4分种，长满单层传代，连续8代培养。血清浓度10%，LG-DMEM培养基，T75培养瓶（透气），37℃、5%CO₂培养，对照为澳洲胎牛血清；

2. 实验结果

2.1 细胞形态

2.2 细胞计数

◆结果分析

1. 人脐带间充质干细胞原代培养第15天后，Royacel胎牛血清与对照血清的细胞铺满率均达到98%，细胞形态整齐均一，且无明显分化；细胞连续六次传代，第二代24小时，Royacel与对照血清培养的人脐带间充质干细胞均具有较好的形态，细胞整体展开充分，背景干净，且无明显分化，当培养72小时后，细胞铺满率均达98%；

2. 第六代细胞24小时的细胞形态与第二代无显著差异，培养72小时后，Royacel与对照血清培养的人脐带间充质干细胞铺满率均达98%；形态观察结果显示经连续六次传代后，Royacel培养的人脐带间充质干细胞仍保持干细胞特性；

3. 细胞计数结果显示：Royacel胎牛血清与对照血清的细胞密度及细胞活率无明显差异。

Royacel 胎牛血清在人脐带间充质干细胞培养方面具有良好的稳定性。